中药注射剂安全检查法应用指导原则 （2005年版一部）
附录 XⅧ B 中药注射剂安全检查法应用指导原则
本指导原则为中药注射剂临床使用的安全性和制剂质量可控性而定。包括异常毒性检查法、降压物质检查法、过敏反应检查法、溶血与凝聚检查法、热原检查法、细菌内毒素检查法。中药注射剂可参照本指导原则进行检查项目的适用性研究。
检查限值
检查限值可按以下各项目内容要求进行研究。研究确定限值后，应进行三批以上供试品的检查验证。
1、异常毒性检查
（1）制定本检查项限值前，须先求得中药注射剂单次给药的半数致死量（LD50）和最低致死量（LD5），并了解其毒性反应症状。给药途径通常为静脉注射，也可根据临床用药情况选择其他途径，当一个注射剂有几种给药方式，如皮下注射、肌内注射、静脉推注及静脉滴注时，至少应做静脉给药的LD50。
观察时间为72小时或更长时间。
（2）中药注射剂异常毒性检查的剂量限值应低于该注射剂的正常毒性剂量（最低致死量），并应高于人临床剂量，同时应考虑到实验室之间的差异、动物反应性的差异和制剂的差异。应根据正常毒性剂量变动范围确定异常毒性检查剂量的限值。
大剂量中药注射剂静脉注射，按常规速度（0.05~0.1ml/s），每只小鼠0.8ml，20只小鼠仍末见死亡或毒性反应，可以该最大给药剂最作为异常毒性检查的剂量限值。
中药注射剂异常毒性检查的观察时间一般为48小时，以死亡为观察指标，并记录观察期毒性反应情况。
2、降压物质检查
（1）确定供试品对麻醉猫能否引起血压下降及降压值与剂量间的关性。
（2）凡有可能产生类组胺样急性降血压反应的静脉注射剂均应进行降压物质检查。
（3）小剂量注射液一般根据临床用药剂量或不低于临床用量来估算供试品的剂量限值。
（4）大剂量注射剂如果按静脉注射原液2ml/kg剂量未见降压反应，该剂量可以作为给药限值。
3、过敏反应检查
（1）观测供试品对豚鼠腹腔注射（或皮下注射）和静脉给药急性毒性反应。
（2）根据豚鼠毒性反应剂量和临床使用剂量确定豚鼠致敏剂量和攻击剂量。除特殊情况外（如刺激性较大），一般致敏以腹腔注射为主，攻击以静脉注射为主。攻击剂量应大于致敏剂量，但两种剂量均应小于急性毒性最小反应剂量。
（3）预试验应取至少9只豚鼠，分3组，三次致敏后，在首次致敏日后14日、21日、28日进行攻击或抗体滴度试验，以确定攻击最佳反应时间。
（4）必要时，预试验采用半成品进行致敏和攻击研究，以确定该注射剂成分和工艺有无致敏的可能性。如半成品或工艺过程无致敏性，可考虑不进行过敏反应检查。
4、溶血与凝聚检查
观察供试品原液和稀释液有无溶血和凝集反应，按溶血和凝聚检查法进行试验，试验研究应同时设供试品管、阳性对照管、阴性对照管、供试品阴性对照管。如有阳性反应，应测定无反应的量小稀释度，结合该药品临床用法用量，以确定检查稀释限值。
5、热原检查
（1）家兔热原检查剂量应为人用每公斤体重每小时最大供试品剂量的1～3倍。
（2）供试品若非等渗或过敏过碱，应进行调整。
（3）热原检查剂量不应使家兔体温下降或产生毒性反应，由此而干扰热原检查时，应采取缓慢注射等措施，如仍不能消除干扰，应尽可能采用细菌内毒素检查法。
6、细菌内毒素检查
（1）中药注射剂内毒素限值，按细菌内毒素检查法（附录ⅩⅢ D）要求确定，由于工艺、成分复杂，可变因素多等原因，计算限值时应根据生产和临床用药情况做必要调整，适当提高限值要求。
（2）由于中药性注射剂干扰因素多，在方法学研究中应尽可能使用国内不同厂生产的鲎试剂和不同批号的供试品（3批以上）进行干扰试验。如发现差异较大或干扰试验变化较大，应考虑采用热原检查法。
异常毒性检查法
本法系将一定量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定的时间内观察小鼠出现的死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。
供试验用的小鼠应健康合格，体重17~20g，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。作过本试验的小鼠不得重复使用。
供试品溶液的配制 除另有规定外，用氯化钠注射液按各品种项下规定的浓度制成供试品溶液。
检查法 除另有规定外，取上述小鼠5只，按各品种项下规定的给药途径，每只小鼠分别给予供试品溶液0.5ml。给药途径分为以下几种。
静脉注射 将供试品溶液注入小鼠尾静脉，应在4~5秒匀速注射完毕，规定缓慢注射的品种可延长至30秒。
腹腔注射 将供试品溶液注入小鼠腹腔。
皮下注射 将供试品溶液注入小鼠腹部或背部两侧皮下。
口服给药 将供试品溶液通过适宜的导管，灌入小鼠胃中。
结果判断 除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡时，应另取体重18～19g的小鼠10只复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡。
降压物质检查法
本法系比较组胺对照品（S）与供试品（T）引起麻醉猫血压下降的程度，以判定供试品中所含降压物质的限度是否符合规定。
对照品溶液的配制 精密称取磷酸组胺对照品适量，按组胺计算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分装于适宜的容器内，4~8℃贮存，如无沉淀析出，可在3个月内使用。
对照品稀释液的配制 临用前，精密量取组胺对照品溶液适量，用氯化钠注射液配成每1ml中含组胺0.5μg的溶液。
供试品溶液的配制 按品种项下规定的剂量，配成适当浓度的供试品溶液。试验时，一般要求供试品溶液与对照品稀释液的注入体积应相等。
检查法
取健康合格、体重2kg以上的猫，雌者无孕，用适宜的麻醉剂（如巴比妥类）麻醉后，固定于保温手术台上，分离气管并插入插管以使呼吸畅通，必要时可进行人工呼吸。在一侧颈动脉插入连接测压计的动脉套管，管内充满适宜的抗凝剂溶液，以记录血压，也可其他适当仪器记录血压。在一侧股静脉内插入静脉插管，供注射药液用。试验中应注意保持动物体温。全部手术完毕后，将测压计调节到与动物血压相当的高度（一般为13.3~16.0kPa），开启动脉夹，待血压稳定后，方可进行药液注射。各次注射速度应相同，每次注射后立即注入一定量的氯化钠注射液，相邻两次注射的间隔时间一致（3~5分钟），每次注射应在前一次反应恢复稳定以后进行。
自静脉依次注入上述对照品稀释液，剂量按动物体重每1kg注射组胺0.05μg、0.1μg及0.15μg，重复2~3次，如0.1μg剂量应致的血压下降值均不小于2.67kPa，同时相应各剂量所致反应的平均值有差别，可认为该动物灵敏度符合规定。
取对照品稀释液按动物体重每1kg注射组胺0.1μg的剂量（ds），供试品溶液按品种项下规定的剂量（dT），照下列次序注射一组4个剂量：ds、dT、dT、ds。然后以第一与第三、第二与第四剂量所致的反应分别比次，如dT所致的反应值均不大于ds所致反应值的一半，即认为供试品的降压物质检查符合规定。否则应按上述次序继续注射一组4个剂量，并按相同方法分别比较两组内各对ds、dT剂量所致的反应值，仍认为供试品的降压物质检查符合规定，如dT所致的反应值均大于ds所致的反应值，即认为供试品的降压物质检查不符合规定，否则应另取动物复试。如复试的结果仍有dT所致的反应值大于ds所致的反应值，即认为供试品的降压物质检查不符合规定。
所用动物经灵敏度检查如仍符合规定，可继续用于降压物质检查。
过敏反应检查法
本法系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体内，间隔一定时间后静脉注射供试品进行攻击，观察动物出现过敏反应的情况，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应。
供试验用豚鼠应健康合格，体重250~350g，雌鼠应无孕。在试验前和试验过程中，均应按正常饲养条件饲养。做过本试验的豚鼠不得重复使用。
供试品溶液的配制 除另有规定外，均按各品种项下规定的浓度配制成供试品溶液。
检查法 除另有规定外，取上述豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供试品0.5ml，共3次，进行致敏。然后将其均分为2组，每组3只，分别在首次注射后第14日和第21日，由静脉注射供试品1ml进行攻击。每日观察每只动物的行为和体征，首次致敏和攻击前测定和记录每只动物的体重。观察攻击后30分钟内，动物有无竖毛，呼吸困难，抽搐等过敏反应症状。
结果判断 静脉注射供试品后30分钟后，不得出现过敏反应。如有竖毛，喷嚏，干呕，连续咳嗽3声和呼吸困难等现象中的2种或2种以上，或出现抽搐，休克，死亡现象之一者，判供试品不符合规定。
溶血与凝聚检查法
本法系将一定量供试品与2%的兔（或羊）红细胞混悬液混合，温育一定时间后，观察其对红细胞状态是否产生影响的一种方法。
2%红细胞混悬液的制备 取兔或羊血数毫升（约20ml），放入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，每分钟1000~1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2~3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的混悬液，供试验用。
供试品溶液的制备 除另有规定外，临床用于非血管内给药的注射剂，以各药品使用说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1：3稀释后作为供试品溶液；用于血管内给药的注射剂以各药品使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。
检查法 取洁净试管5只，编号，1、2号管为供试品管，3号管为阴性对照管，4号管为阳性对照管，5号管为供试品对照管。按下表所示依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育。3小时后观察溶血和凝聚反应。
试管编号 1、2 3 4 5
2%红细胞混悬液/ml 2.5 2.5 2.5
0.9%氯化钠溶液/ml 2.2 2.5 4.7
蒸馏水/ml 2.5
供试品溶液/ml 0.3 0.3
如试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生，如红细胞全部下沉，上清液无色澄明，或上清液虽有色澄明，但1号管和5号管比色无显著差异，则表明无溶血发生。
若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝发生。如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物置于载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或玻片上不被冲散者为凝聚。
结果判断 当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若供试品管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，判供试品符合规定，若供试品管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，判供试品不符合规定。
热原检查法
见热原检查法（附录ⅩⅢ A）。
细菌内毒素检查法
见细菌内毒素检查法（附录ⅩⅢ D）。