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  文件名称:  超声波破碎细胞的常见问题
  公司名称:  北京星越天成科技有限公司
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大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候,用含有1%triton-X-100PBS悬浮,然后超声的效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。

    **沉淀直接加样品1buffer,再加5ul的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。在表达重组蛋白后超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbstris缓冲液都是这样,*后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。

 1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部,约1cm(我一般是距底部0.5mm)。功

率根据仪器不同会有所不同,但你可以观察液面,有波动但不要太剧烈就好。

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